透析是利用半透膜的選擇性在溶液里分離大分子和小分子的一種分離技術(shù),常常用于除去蛋白或核酸樣品中的鹽、變性劑、還原劑之類的小分子雜質(zhì),有時(shí)也用于置換樣品緩沖液。樣品在膜的一邊,緩沖液在另一邊,小分子即向兩邊擴(kuò)散直到平衡,而大分子則由于半透膜的阻攔而留在一端,通過(guò)不斷更換緩沖液,即可將樣品中要除掉的小分子稀釋到足夠低的濃度。
技術(shù)參數(shù):
△PH穩(wěn)定范圍 : 5-9
△污染物水平: 硫化物<0.3%; 重金屬<50ppm
△化學(xué)兼容性: 與很多鹽兼容,比如CaCl2, (NH4)2SO4;還可與分子生物學(xué)及酶學(xué)中常用的水溶劑、有機(jī)溶劑兼容,比如異丙醇、乙醇和丙酮。
△溫度抵抗性:可煮沸,可高壓滅菌。
△蛋白吸附 :每克透析袋吸附蛋白量小于1ng
透析袋使用前處理方法:
1. 把透析袋剪成適當(dāng)長(zhǎng)度(10-20cm)的小段。
2. 在大體積的2%(W/V)碳酸氫鈉和 1mmol/L EDTA(pH 8.0)中將透析袋煮沸10分鐘。
3. 用蒸餾水徹底清洗透析袋。
4. 放在 1mmol/L EDTA(pH 8.0)中將之煮沸10分鐘。
5. 冷卻后,存放于4度,必須確保透析袋始終浸沒(méi)在溶液內(nèi)。從此時(shí)起取用透析袋是必須戴手套。
6. 用前在透析袋內(nèi)裝滿水然后排出,將之清洗干凈。
7.實(shí)驗(yàn)要求不高的可以用簡(jiǎn)易處理方法:在沸水中煮10min即可使用。
透析袋的選擇:
(1)正確選擇合適的截留分子量
截留分子量的選擇是以預(yù)留在膜內(nèi)的大分子的分子量和將要被除去的小分子污染物的分子量為基礎(chǔ)的。
為達(dá)到合理有效的分離,需分離的兩種物質(zhì)分子量的比率至少為25.
選擇截留分子量的經(jīng)驗(yàn)法則:選擇截留分子量值約為要保留的大分子分子量的一半,以獲得至少90%
的保留率。
(2)正確選擇扁平寬度
透析袋扁平寬度的選擇取決于樣品體積和透析容量。較小的透析管透析更快;較大的透析管因擴(kuò)散
距離較長(zhǎng)透析較慢。為易于使用,建議使用總長(zhǎng)(包括閉合夾和頂部空間)為大約10-15厘米的透析袋
(3)透析袋的化學(xué)相容性
化學(xué)相容性主要用作使用指導(dǎo),不作為化學(xué)相容的保證。溫度,濃度,長(zhǎng)時(shí)間曝光等因素的改變可能
影響產(chǎn)品的使用。建議您自設(shè)條件進(jìn)行測(cè)試。
透析袋的使用:
下述透析程序是一個(gè)普遍的基礎(chǔ)透析過(guò)程。在開(kāi)始透析之前應(yīng)考慮到許多變數(shù)。
透析樣品溶劑、膜的化學(xué)相容性、膜的截留分子量,透析溶劑、透析體積、溫度等變量都會(huì)影響透析速率,因此,一些應(yīng)用中下述透析過(guò)程可能需要適當(dāng)?shù)淖兓?/span>
1. 把適量的透析液(緩沖液)加入透析裝置。透析液的體積應(yīng)為樣品體積量的100倍。
(例如:在一升透析液中透析10毫升的樣品)
2. 裁剪適當(dāng)長(zhǎng)度的透析管。預(yù)留一段額外長(zhǎng)度(約占總樣品體積量的20%)作為頭部空間。
3. 把透析管插入打開(kāi)的透析夾,在約超出透析夾3-5毫米的位置再夾住。不要折疊透析袋。
4. 由透析管開(kāi)口端將樣品裝入。調(diào)整一下頂部空間的長(zhǎng)度,夾緊透析夾。
5. 把透析樣品放在合適的透析緩沖液中。
6. 透析要根據(jù)具體的應(yīng)用需求。通常情況下,允許經(jīng)過(guò)一夜透析。在持續(xù)透析的過(guò)程中,至少要進(jìn)行3次全部更換透析液。
建議在(透析后)2-4小時(shí),6-8小時(shí)和10-14小時(shí)(第2天早晨)更換透析液。
在后一次透析液的更換后要至少繼續(xù)進(jìn)行2小時(shí)的透析。
注:對(duì)于高濃度污染物,樣品可能需要較長(zhǎng)的時(shí)間透析,透析液需要更頻繁的更換。
7. 透析溫度主要取決于樣品。溫度限制主要取決于膜的類型。
纖維素透析袋可以承受的溫度高達(dá)37℃,再生纖維素透析袋可以承受的溫度高達(dá)60℃。