本品為預(yù)先制配好的快速轉(zhuǎn)印緩沖液,含散熱因子配方
可承受400mA電流在30分鐘即完成蛋白轉(zhuǎn)印過(guò)程
(視轉(zhuǎn)印目的蛋白分子量的大小來(lái)調(diào)整轉(zhuǎn)印時(shí)間長(zhǎng)短)
常溫條件下轉(zhuǎn)印,無(wú)須在冰浴條件下進(jìn)行
可兼容適用于其他品牌制成的PAGE膠或電泳后的PAGE膠
搭配QuickRun能達(dá)到更好條帶效果
適用于不同品牌轉(zhuǎn)印設(shè)備,無(wú)須替換設(shè)備
未開(kāi)封常溫條件下保存五年
產(chǎn)品優(yōu)點(diǎn):
本配方緩沖液可以大大加快轉(zhuǎn)印的速度,并且在轉(zhuǎn)印過(guò)程中,不會(huì)產(chǎn)生大量熱量,
不會(huì)導(dǎo)致蛋白變異或降解,不會(huì)破壞蛋白本身的完整性。
•快速: 相較傳統(tǒng)方式的90分鐘-4小時(shí),此緩沖液可以將轉(zhuǎn)印時(shí)間縮短到< 50分鐘。
•兼容性: 可使用現(xiàn)有設(shè)備,適用所有的蛋白膠,濕轉(zhuǎn)系統(tǒng)以及膜類型。
•轉(zhuǎn)印效率高: 100% 轉(zhuǎn)移6-240kD蛋白。
•工作液可重復(fù)使用3-5次。
注意:
1.具體轉(zhuǎn)印時(shí)間需針對(duì)蛋白大小略微調(diào)整;不同廠家電源供應(yīng)器的電阻所造成電壓和電流失衡
需留意,我們所建議條件是400mA電流對(duì)應(yīng)約為80-110V電壓。
2.緩沖液可以反復(fù)利用,但每次使用的轉(zhuǎn)印時(shí)間會(huì)改變緩沖液的離子濃度和PH值,因此重復(fù)使用
次數(shù)可觀察緩沖液的澄清度及黏稠度;
3.反復(fù)利用的緩沖液須冷藏保存,以避免長(zhǎng)菌;
4.不同蛋白大小所需轉(zhuǎn)印時(shí)間不同,一般50KDa大小以內(nèi)的目的蛋白約30分鐘,50KDa-120KDa的
目的蛋白需要多加5-10分鐘, 120KDa-180KDa的目的蛋白可再加5-10分鐘
(以上僅供參考建議,實(shí)際要考慮目的蛋白在總蛋白中的含量濃度占比)
用于蛋白轉(zhuǎn)印實(shí)驗(yàn)(將蛋白從膠上轉(zhuǎn)移到PVDF膜上)
在WB過(guò)程中從SDS-PAGE膠上轉(zhuǎn)移蛋白至膜上是非常關(guān)鍵的步驟
優(yōu)化轉(zhuǎn)移時(shí)間往往需要實(shí)驗(yàn)多次,如何保證蛋白完全轉(zhuǎn)移技巧:
1.使用預(yù)染的marker:
預(yù)染marker能夠直觀的觀察到跑膠情況,而且在轉(zhuǎn)移過(guò)程中也是很好的工具,
在完成印跡后觀察膜上的 marker 看是否所有條帶都已經(jīng)轉(zhuǎn)移至膜上。
2.在轉(zhuǎn)印裝置中加兩塊膜:
小分子量的蛋白轉(zhuǎn)移的比較快,為保證大分子蛋白的轉(zhuǎn)印,長(zhǎng)時(shí)間的轉(zhuǎn)印可能使小分子蛋白透過(guò)膜,
可以加入兩塊膜,如果能在第二塊膜上檢測(cè)到小分子蛋白,說(shuō)明轉(zhuǎn)印時(shí)間過(guò)長(zhǎng)。
3.在轉(zhuǎn)印后對(duì)膠染色:
如果轉(zhuǎn)印時(shí)間不夠優(yōu)化,通過(guò)對(duì)膠染色,在膠上能夠觀察到未轉(zhuǎn)移完全的蛋白,
這種情況在轉(zhuǎn)印大分子蛋白是常見(jiàn),使用銀染或者考馬斯亮藍(lán)的方法都可以。