CAPS主要用于生化診斷試劑盒、DNA/RNA提取試劑盒及PCR診斷試劑盒里,用作酶化學(xué)及HPLC分離堿性藥物的緩沖液。3-環(huán)己氨基丙磺酸(CAPS)
還可以支持堿性磷酸酶活性并在pH為10.5時(shí)抑制氣單胞菌屬的生長,以及溶于去離子水,調(diào)pH至11.0后,用于纖連蛋白的純化。
CAPS用作生物緩沖劑時(shí)需要較好的純度,一般是需要分析純以上級(jí)別。
在核酸提取中,3-環(huán)己氨基丙磺酸(CAPS)和3-[(3-膽酰胺基丙基)二甲基銨基]-1-丙磺酸鹽(CHAPS)、3-(環(huán)己基氨基)-2-羥基-1-丙磺酸鹽(CAPSO)、
和2-(環(huán)己基氨基)乙磺酸鹽(CHES)等一起制備用于核酸雜交的溶液,能夠降低非特異性雜交產(chǎn)物的產(chǎn)率而提高核酸雜交特異性,同時(shí)維持目標(biāo)雜交產(chǎn)物的產(chǎn)率。
在特定病原體的鑒定、遺傳性疾病的診斷、基因序列的分析等有重要價(jià)值。
在 1960 年代中期,N.E.Good鑒于一般的緩沖液系統(tǒng)并不適合生化實(shí)驗(yàn)所使用,
必須用人為設(shè)計(jì)和人工合成的方法來找到專門用于生命科學(xué)研究的特定的緩沖體系
這些緩沖體系們都具有以下特質(zhì):
1.pKa 在6~8 之間;
2.在水溶液中有高溶解度;
3.鹽效應(yīng)很?。?/span>
4.不易被運(yùn)送通過細(xì)胞膜;
5.不易受溫度、離子組成、濃度等因素影響解離度;
6.不會(huì)與金屬離子形成錯(cuò)合物,或錯(cuò)合物不沉淀、不干擾生物活性;
7.化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定。
Good’s緩沖液的主要優(yōu)點(diǎn)是不參加和不干擾生 物化學(xué)反應(yīng)過程,對(duì)酶化學(xué)反應(yīng)等無抑制作用,
所以它們專門用于細(xì)胞器和極易變性的、對(duì)pH敏感的蛋白質(zhì)和酶的研究工作。
其缺點(diǎn)是:
①價(jià)格昂貴
②對(duì)測定蛋白質(zhì)含量的雙縮脲法和Lowry法不適用,因?yàn)樗鼈儠?huì)使空白管的顏色加深。
三種生物緩沖劑MOPS、HEPES、CHAPS的特征和應(yīng)用:
MOPS的特征
MOPS的全化學(xué)名稱為3-(N-Morpholino)-Propanesulfonic Acid,是一種兩性離子生物緩沖劑。常溫下為白色粉末狀固體,親水性高,水溶性好(20℃時(shí)1000 g / L)。
將MOPS溶于水時(shí),其水溶液外觀為無色。
MOPS的應(yīng)用和注意事項(xiàng)
由于有用的pH范圍介于6.5和7.9之間,MOPS經(jīng)常用于分子生物學(xué)和生化研究。MOPS不僅是用于蛋白質(zhì)純化和提取的pH緩沖劑,還是細(xì)菌,酵母和哺乳動(dòng)物細(xì)胞的緩沖培養(yǎng)基的成分,也是通過瓊脂糖凝膠電泳分離RNA的運(yùn)行緩沖液的最佳選擇。由于缺乏與大多數(shù)金屬離子形成螯合物的能力建議在制備含金屬離子的溶液時(shí)將MOPS用作非配位緩沖液。
需要注意的是,如果您打算在使用MOPS之前對(duì)其進(jìn)行滅菌,請(qǐng)不要對(duì)其進(jìn)行高壓滅菌。根據(jù)相關(guān)研究文獻(xiàn),當(dāng)通過高壓滅菌法對(duì)MOPS進(jìn)行滅菌時(shí),未知的淡黃色物質(zhì)會(huì)作為降解產(chǎn)物產(chǎn)生,因此,推薦使用通過孔徑為0.2微米或更小的膜過濾來進(jìn)行MOPS滅菌。
HEPES的特征
HEPES的全化學(xué)名稱為4-羥乙基哌嗪丙磺酸,是一種非離子兩性生物緩沖劑。常溫下為白色粉末狀固體,親水性高,水溶性好。
HEPES緩沖液的應(yīng)用
由于培養(yǎng)中細(xì)胞的生長和代謝會(huì)導(dǎo)致培養(yǎng)基的環(huán)境pH值發(fā)生劇烈變化,因此,為了維持可以穩(wěn)定培養(yǎng)細(xì)胞的環(huán)境,有必要向其中添加適量的某些生物緩沖液。文化媒體。但是,市場上有如此多的生物緩沖液和替代品可用于細(xì)胞培養(yǎng),為什么要使用HEPES?
大多數(shù)細(xì)胞的最佳培養(yǎng)環(huán)境是pH 7.2-pH 7.4,HEPES的緩沖范圍恰好在pH 6.8-pH 8.2內(nèi),這對(duì)于細(xì)胞培養(yǎng)是有利的。與其他緩沖液(例如PBS(磷酸鹽緩沖鹽水)和TRIS)相比,HEPES在維持細(xì)胞培養(yǎng)基的pH值方面具有更高的穩(wěn)定性,這也是HEPES廣泛用于細(xì)胞培養(yǎng),組織培養(yǎng),蛋白質(zhì)純化和提取,免疫沉淀,細(xì)胞裂解,活細(xì)胞成像和其他生物/生化研究的原因。
CHAPS的特征
CHAPS(CAS 75621-03-3)是一種不變性的兩性離子表面活性劑,全化學(xué)名稱為3-[(3-氯氨基丙基)二甲基銨基] -1-丙烷磺酸鹽。在常溫下為白色粉末固體,具有良好的水溶性(50 mg / mL),但在分子水平上也具有疏水性。將CHAPS溶于水時(shí),其水溶液的外觀將是無色至淺黃色的透明色。
CHAPS的應(yīng)用
一些研究表明,與NP-40和Triton X-100相比,CHAPS可以溫和有效地破壞核膜,溶解膜蛋白并破壞蛋白-蛋白相互作用(PPI)。此外,CHAPS可以保護(hù)蛋白質(zhì)的天然狀態(tài)或構(gòu)象,而且可以維持蛋白質(zhì)的活性和功能。因此CHAPS被廣泛應(yīng)用于生物科學(xué)研究領(lǐng)域,如細(xì)胞裂解和蛋白質(zhì)純化。重要的是要注意,在使用CHAPS配制任何溶液時(shí),請(qǐng)盡量不要?jiǎng)×覔u晃或攪動(dòng)。
CHAPS 是一種用于膜生物化學(xué)的非變性兩性離子洗滌劑。
可用于溶解膜蛋白以及打斷蛋白-蛋白相互作用。
CHAPS 具有低膠束分子量 (6,150) 和高臨界膠束濃度 (6-10mM),因此可通過透析從樣品中除去。
它也適合在等電聚焦和二維電泳中用于溶解蛋白質(zhì)。CHAPS 常用于非變性(無尿素)等電聚焦,已發(fā)現(xiàn)它對(duì)某些亞細(xì)胞制備物和植物蛋白能夠得出優(yōu)異的分辨率。
通常將介于 2-4% (w/v) 間的濃度用于等電聚焦凝膠。
