溴化乙錠染液是檢測DNA/RNA最常用的染料。EB是DNA嵌入劑,嵌入在DNA雙螺旋堿基之間。DNA吸收254nm處的紫外輻射并傳遞給染料,而被結(jié)合的染料本身吸收302nm和366nm的光輻射。被吸收的能量在可見光譜紅橙區(qū)的590nm處重新發(fā)射出來。溴化乙錠-DNA復合物的熒光產(chǎn)率比沒有結(jié)合DNA的染料高出20-30倍。
溴化乙錠(Ethidium Bromide, EB)是一種多環(huán)芳烴熒光小分子和核酸嵌入劑(核酸插入劑),普遍用作一種DNA和RNA電泳的染料。一旦與dsRNA結(jié)合,熒光增強20倍;與dsDNA結(jié)合,熒光增強20-30倍,因此,當用低濃度EB染色(10µg/ml),都沒必要做背景脫色處理。EB用于各種核酸相關(guān)的熒光分析實驗。也能結(jié)合ssDNA(并不是很強)和tsDNA。由于能結(jié)合DNA,EB也能用作一種DNA聚合酶抑制劑。EB還能與吖啶橙(AO)聯(lián)合使用來區(qū)分活細胞、凋亡細胞和壞死細胞。EB在300nm和360nm處有最大紫外吸收峰,最大發(fā)射峰在590nm。
本品是溴化乙錠/EB和去離子水組成(10 mg/ml in Water),提供溶液形式儲存液,可稀釋2萬倍以0.5µg/ml使用染色。
產(chǎn)品使用(電泳染色用)
1) EB通常加入凝膠和電泳緩沖液內(nèi),工作濃度為0.5µg/ml。注意:線性化dsDNA的電泳遷移率在含EB的情況下約降低15%。
2) 凝膠跑完后用EB染色,將凝膠浸泡在含0.5µg/ml EB的電泳緩沖液或水中,室溫染30-45min。
3) 根據(jù)實際情況決定是否脫色處理。對于很微量DNA(<10ng),通過將凝膠浸泡在水或1mM MgSO4中室溫脫色20min以去除未結(jié)合EB引起的背景熒光,能夠更容易檢測到。
注意事項:
1) EB是一種強力的突變劑,操作過程中必須嚴格做好防護措施,不要有任何身體的直接接觸。
2) EB廢液也要按照實驗室標準凈化處理再行丟棄,以避免環(huán)境污染和危害人體健康??墒褂梦宜镜腅B去除劑對EB污染物進行處理后再行丟棄。
3) 熒光染料均存在淬滅問題,請盡量注意避光,以減緩熒光淬滅。
4) 為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。