內(nèi)參也叫看家基因,在組織或細(xì)胞中都會(huì)表達(dá),且表達(dá)量在不同組織或細(xì)胞中幾乎是相同的,一般有α-Tublin ,β-actin ,GAPDH 等,在Western Blotting 中使用內(nèi)參其實(shí)就是在WB 過程中的另外用內(nèi)參對(duì)應(yīng)的抗體檢測內(nèi)參。其作用有二:
1.是看提取蛋白質(zhì)量的好壞。如果做western 的時(shí)候,內(nèi)參照蛋白有條帶,而目的蛋白沒有,說明蛋白的提取和轉(zhuǎn)膜等步驟沒有問題,是目的蛋白的抗體質(zhì)量不好或者是稀釋倍數(shù)不對(duì)。
2.是比較客觀的說明目的蛋白的表達(dá)情況,消除上樣量等的誤差。不同的樣品之間由于蛋白提取的量有差別,可能強(qiáng)陽性的表達(dá)跑出來的帶很弱。因此設(shè)立內(nèi)參照,比較不同樣品之間的表達(dá)情況。
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