預(yù)染蛋白分子量是一些純化好的蛋白混合物,通過與染料共價(jià)耦聯(lián),在電泳過程中或者轉(zhuǎn)膜時(shí)可以直接觀察到。預(yù)染蛋白分子量的出現(xiàn)方便了我們的實(shí)驗(yàn),這種蛋白分子量標(biāo)準(zhǔn)可以幫助我們?cè)陔娪緯r(shí)、電泳后,以及轉(zhuǎn)膜后監(jiān)測(cè)電泳情況和估計(jì)遷移率——比如,已知垂直電泳最佳分辨區(qū)域大約在膠的2/3處,如果使用預(yù)染Marker就可以預(yù)測(cè)目標(biāo)蛋白進(jìn)入最佳分辨區(qū)時(shí)停止電泳以得到最佳分辨效果;如果觀察到Marker電泳異常也可以及時(shí)終止電泳;另外在Western Blot轉(zhuǎn)膜以后可以直接觀察蛋白轉(zhuǎn)膜是否完全,還可以在膜上標(biāo)記蛋白分子量,所以吸引了許多實(shí)驗(yàn)室人員購買預(yù)染蛋白標(biāo)準(zhǔn)。值得注意的是預(yù)染蛋白Marker與染料共價(jià)耦聯(lián),所以在不同的緩沖條件下電泳時(shí)遷移特性可能會(huì)發(fā)生某些變化,可能導(dǎo)致一些偏差,所以不太適合精確定位蛋白——不過多數(shù)情況下Marker的條帶未必能和我們的目標(biāo)蛋白完全一樣,我們得到的也不過是一種相對(duì)Marker指示的參考大小,最后都需要Western來定性,所以如果不是要區(qū)分大小相近的條帶,預(yù)染Marker還是很好用的,而且也可以和未染色的蛋白標(biāo)準(zhǔn)一起使用。
預(yù)染蛋白標(biāo)準(zhǔn)可以分為兩種:單色預(yù)染和多色預(yù)染,其實(shí)區(qū)別就在于幫助在實(shí)驗(yàn)過程中辨認(rèn)某個(gè)條帶的大小——Marker條帶越多參考價(jià)值越大,可就越難辨認(rèn)區(qū)分,如果用不同的顏色來區(qū)別就比較好辨認(rèn)啦。如果沉悶的電泳實(shí)驗(yàn)中跑出五顏六色的彩虹Marker,此時(shí)心情想必會(huì)愉快一些!單色的Marker通常是利用其中某些條帶加倍濃度來提示其大小的。還有一點(diǎn)特別要注意,由于轉(zhuǎn)膜是一個(gè)將膠里的Marker濃縮在潔白的膜上,所以需要的上樣量相對(duì)少一些,如果想要在電泳過程中看到美麗的“彩虹”,或者單色的Marker往往需要比說明書里多加一些Marker的。
1.寬范圍:10-180 kDa。
2.立即可用: 可直接上樣。
3.易分辨: 其中,25和65kDa的條帶為綠色和紅色。
4.清晰的條帶。
三色預(yù)染蛋白Marker包含10-180kDa的10種蛋白質(zhì),能夠產(chǎn)生清晰、明亮的條帶。三色預(yù)染蛋白能夠在電泳過程中檢測(cè)蛋白分離,并估計(jì)目的蛋白的大小,也可用于檢測(cè)蛋白質(zhì)免疫印跡時(shí)蛋白的轉(zhuǎn)移效率。
上樣建議:
• 15孔或10孔小膠,電泳時(shí)每孔上樣3 μl 或 5 μl,能得到清晰條帶。
• Western轉(zhuǎn)印,每孔上樣1.5-2.5 μl。
• 厚度>1.5 mm的膠或大膠,適當(dāng)增加每孔上樣量。
蛋白MARKER指的是做SDS Page或Western時(shí),用來參照的標(biāo)準(zhǔn)蛋白,顯示蛋白大小,用以與自己蛋白進(jìn)行對(duì)比,估計(jì)蛋白大小。在免疫印跡(Western blot)試驗(yàn)中,分子量Marker雖不起眼,但意義重大,是陽性對(duì)照,是大小的標(biāo)準(zhǔn),是必須的。
非預(yù)染蛋白marker和預(yù)染蛋白marker有很多區(qū)別不過其中最重要和明顯的區(qū)別就是非預(yù)染蛋白marker跑完膠之后一定要染色脫色才能在膠上看見預(yù)染蛋白marker跑完膠之后不需要染色脫色直接就可以在膠上看見 至于其他都是些細(xì)節(jié)上的區(qū)別,比如有些預(yù)染蛋白marker會(huì)做成彩虹色的,以便區(qū)別分子量大小有些預(yù)染蛋白marker的條帶比較多等等