HEPES全稱為N-2-Hydroxyethylpiperazine-N-2-Ethane Sulfonic Acid,中文名稱為4-羥乙基哌嗪乙磺酸,
是一種常用的生物緩沖劑,pKa(25℃)=7.5,有效緩沖范圍為pH6.8-8.2。
HEPES最大的優(yōu)點(diǎn)是,能夠在開放環(huán)境中較長(zhǎng)時(shí)間恒定溶液的PH范圍。
HEPES不能通過生物膜,對(duì)生化反應(yīng)影響有限,是一種化學(xué)和酶穩(wěn)定的物質(zhì),
而且HEPES對(duì)可見光和紫外光的吸收度極低。
因此一般認(rèn)為,HEPES是一種優(yōu)良的生物緩沖劑,對(duì)細(xì)胞無毒性作用,
使用終濃度為10-50 mM,細(xì)胞培養(yǎng)常用10 mM。
本產(chǎn)品為 20X Tris-HEPES-SDS Buffer
配方如下:
稱量下列試劑,置于1L燒杯中
0.1M Tris, 0.1M HEPES, 3 mM SDS, pH 8.0
Tris 12.114g
HEPES 23.831g
SDS 0.86514g
向燒杯中加入約800ml的去離子水,充分?jǐn)嚢枞芙猓?span style="text-indent: 0cm;">調(diào)整pH至8.0,
加入去離子水將溶液定容至1L后,室溫保存。
本產(chǎn)品為20×儲(chǔ)備液,使用時(shí)需用蒸餾水稀釋至1×工作液濃度。
主要用于變性HEPES體系凝膠電泳
HEPES在蛋白質(zhì)研究中,常用作陽離子交換色譜法中結(jié)合緩沖液的組分和洗脫液;
在DNA研究中,用作磷酸鈣和DNA沉淀物形成體系的緩沖液,
AFM以及電穿孔實(shí)驗(yàn)中的緩沖液。
另外,HEPES對(duì)DNA和限制酶之間的反應(yīng)有一定干擾,
也不適合用于Lowry氏法測(cè)定蛋白質(zhì)含量。