將PCR產(chǎn)物快速、定向、有效的克隆到任何目標載體而設(shè)計,有效避免了在克隆過程中遇到的合適內(nèi)切酶的選擇、磷酸化、補平、加A、使用中間載體的復雜步驟。無須連接酶,只需要把目標載體線性化(平末端,黏性末端都可以) ,PCR產(chǎn)物無須任何酶促處理,直接和目標載體混合,20-30分鐘一站是解決問題
原理:
根據(jù)酶切后線性化載體的兩端序列,分別在目的基因兩端設(shè)計15base與載體末端同源的序列,PCR擴增產(chǎn)物二端就會分別帶有15bp和線性化載體兩端相同序列,PCR產(chǎn)物和線性化載體與同源重組酶充分混勻,22度C溫浴30分鐘后,按傳統(tǒng)方法轉(zhuǎn)化大腸桿菌就可以高效、定向?qū)?/span>PCR產(chǎn)物克隆到目標載體上。
無需藍白班篩選
無需擔心克隆方向
無須擔心陽性克隆比率
隨意挑取克隆陽性率>99%