將G-418粉末用滅菌的超純水配制成常規(guī)儲備液濃度50mg/ml ,并經(jīng)過無菌處理,可以直接使用。
工作液濃度: 5ug/mL (細菌和藻類),400ug/mL 用于篩選哺乳動物細胞,200ug/mL 用于穩(wěn)定哺乳細胞。
G418用于選擇穩(wěn)定轉(zhuǎn)化的細胞,它包含承受轉(zhuǎn)座子Tn5和Tn601的新霉素抗性基因。
G418能夠干擾核糖體功能而阻斷蛋白質(zhì)的合成。通常不作為抗生素使用,而是在原核和真核細胞篩選或穩(wěn)定新霉素抗性基因。
抗性來源于細菌的可以在真核細胞中表達的顯性基因之一。
抗性基因APH(3')II或氨基糖苷磷酸轉(zhuǎn)移酶3'(II)和氨基糖苷磷酸轉(zhuǎn)移酶3'(I)或APH(3')I
G418是一種氨基糖苷類抗生素 ,在分子遺傳試驗中,是穩(wěn)定轉(zhuǎn)染最常用的抗性篩選試劑。
它通過抑制轉(zhuǎn)座子Tn601,Tn5 的基因,干擾核糖體功能而阻斷蛋白質(zhì)合成,對原核和真核等細胞產(chǎn)生毒素
包括細菌、酵母、植物和哺乳動物細胞 ,也包括原生動物和蠕蟲。
G418的這一選擇特性 ,已在基因轉(zhuǎn)移、基因敲除、抗性篩選以及轉(zhuǎn)基因動物等方面得以廣泛應用。